Evaluation of thymic lymphocyte loss of broiler using Digital Analysis of the Lymphoid Depletion System (ADDL) / Avaliação de perda de linfócitos do timo em frangos usando análise digital do sistema de depleção linfóide (ADDL)

The thymus is a lymphoid organ and usually evaluated for the degree of lymphocyte loss with subjective histological techniques. This study aimed to adapt and to apply of the digital analysis of the lymphoid depletion system (ADDL) in the thymus in order to obtain a more accurate analysis. Glucocorticoid was used to induce immunosuppression in 55 broilers at 21 days of age; other 15 broilers were the control group. After euthanasia of the broilers, postmortem examination was made. Both thymic chains were collected and six lobes were selected for histological examination of the degree of lymphocyte depletion (scores 1 to 5) and for submission to all stages of processing by the ADDL system. The artificial constructed neural networks (ANN) obtained 94.03% of correct classifications. In conclusion, it was possible to adopt objective criteria to evaluate thymic lymphoid depletion with the ADDL system.(AU)

O timo é um órgão linfóide, que é normalmente avaliado para o grau de perda de linfócitos a partir de técnicas histológicas subjetivas. Este trabalho teve como objetivo a adaptação e aplicação do sistema de análise digital de depleção linfóide (ADDL) para o timo, a fim de tornar sua análise mais acurada. Glicocorticóides foram utilizados a fim de induzir imunossupressão em 55 aves de 21 dias de idade. Outras 15 aves formaram o grupo controle. Posteriormente, para cada um dos aves, realizou-se a eutanásia e necropsia. Ambas as cadeias do timo foram coletadas e foram selecionadas seis lóbulos para processamento histológico, análise quanto ao grau de depleção linfocitária (escores de 1-5) e submissão a todas as fases do processamento pelo sistema ADDL. Observou-se que a rede neural artificial (RNA) construída obteve 94,03% de classificações corretas. Em conclusão, foi possível adotar critérios objetivos para avaliar a depleção linfóide tímica utilizando o sistema ADDL.(AU)

Virulence genes and antimicrobial resistance of Pasteurella multocida isolated from poultry and swine

Abstract Pasteurella multocida causes atrophic rhinitis in swine and fowl cholera in birds, and is a secondary agent in respiratory syndromes. Pathogenesis and virulence factors involved are still poorly understood. The aim of this study was to detect 22 virulence-associated genes by PCR, including capsular serogroups A, B and D genes and to evaluate the antimicrobial susceptibility of P. multocida strains from poultry and swine. ompH, oma87, plpB, psl, exbD-tonB, fur, hgbA, nanB, sodA, sodC, ptfA were detected in more than 90% of the strains of both hosts. 91% and 92% of avian and swine strains, respectively, were classified in serogroup A. toxA and hsf-1 showed a significant association to serogroup D; pmHAS and pfhA to serogroup A. Gentamicin and amoxicillin were the most effective drugs with susceptibility higher than 97%; however, 76.79% of poultry strains and 85% of swine strains were resistant to sulphonamides. Furthermore, 19.64% and 36.58% of avian and swine strains, respectively, were multi-resistant. Virulence genes studied were not specific to a host and may be the result of horizontal transmission throughout evolution. High multidrug resistance demonstrates the need for responsible use of antimicrobials in animals intended for human consumption, in addition to antimicrobial susceptibility testing to P. multocida.

Behavior of Salmonella heidelberg and Salmonella enteritidis strains following broiler chick inoculation: evaluation of cecal morphometry, liver and cecum bacterial counts and fecal excretion patterns

Over the years, Salmonella Heidelberg (SH) has gained prominence in North America poultry production and in the poultry production of other countries. Salmonella Heidelberg has been isolated and reported from poultry and poultry products in Brazil since 1962, whereas Salmonella Enteritidis (SE) has only emerged as a serious problem in poultry and public health since 1993. These strains of Salmonella can cause intestinal problems in newly hatched chicks, and infection may persist until adulthood. Upon slaughter of chickens, Salmonella can contaminate carcasses, a condition that poses a threat to human health. The aim of this study was to compare the fecal excretion of Salmonella Enteritidis and Salmonella Heidelberg in newly hatched chicks (orally inoculated with 10(5)ufc/mL each) until 20 days of age. In addition, the ratio of cecal villus height:crypt depth (morphometry) and liver and cecum cell counts was analyzed in chicks ranging from 0 to 3 days of age and infected with these two Salmonella strains. One hundred seventeen chicks were separated into one of three experimental groups: a control group, an SE-infected group and an SH-infected group. Eight chicks per group were euthanized at 6, 12 and 72 hours post-inoculation (pi) to allow for Salmonella isolation from the liver and cecum and for the collection of the cecum for villi and crypt analysis. Other birds were allowed to mature to 20 days of age and cloacal swabs were taken at 2, 6, 13 and 20 days pi to compare the fecal excretion of inoculated strains. The Salmonella Enteritidis group had a higher number of cells excreted during the trial. Both strains were isolated from the liver and cecum by 6h pi. At 12h pi the Salmonella Heidelberg group had high cell counts in the cecum. No difference was found in liver cell counts. Both strains showed lower villus height:crypt depth ratio than the control group post-infection.

Número mais provável de Salmonella isoladas de carcaças de frango resfriadas / Most probable number of Salmonella isolated from refrigerated broiler carcasses

A Salmonella permanece um importante problema na avicultura e, considerando os patógenos transmitidos por alimentos, aparece como um dos agentes principais em surtos de toxinfecções alimentares. Para auxiliar na avaliação de riscos em adquirir infecção alimentar via carne de frangos que sofreram cocção inadequada, ou através de contaminação cruzada a partir desses animais, torna-se importante determinar a extensão de contaminação por patógenos em carne crua. No presente trabalho, foram analisadas 180 carcaças de frangos resfriadas, adquiridas em varejos, para pesquisa de Salmonella com determinação do número de células da bactéria. Foi utilizado o método do número mais provável (NMP) nos ágares para isolamento verde brilhante com novobiocina (BGN) e xilose-lisina tergitol 4 (XLT4). Os resultados mostraram 12,2 por cento de ocorrência de Salmonella nas carcaças de frangos resfriadas e a média de NMP de Salmonella por mL, na leitura pelo ágar XLT4 foi de 2,7 células e no ágar BGN foi de 1,3 células. Os sorovares de Salmonella isolados das carcaças de frangos no estudo foram S. Enteritidis, S. Agona, S.Rissen, S. Heidelberg e S. Livingstone. A análise dos resultados demonstrou existir um número variável de células de Salmonella contaminando as carcaças de frango resfriadas que estão à venda ao consumidor.

Salmonella in poultry remains an important worldwide problem, and among foodborne pathogens, the Salmonella appears as one of the most important outbreaks agents. To assess the risks of acquiring infection via undercooked poultry or cross contamination from chickens, it is important to determine the extent of the contamination on raw poultry with this pathogen. In this study, 180 refrigerated broiler carcasses, obtained from local stores, were assessed to recover Salmonella by the most probable number (MPN) method to quantify bacterias cells onto brilliant green agar with novobiocin (BGN) and xylose lysin tergitol 4 agar (XLT4). The results showed 12,2 percent occurrence of Salmonella by conventional microbiological method from refrigerated broiler carcasses. The MPN per ml rates was 2,7 cells on XLT4 agar and 1,3 cells on BGN agar plate. The Salmonella serovars isolated from broiler carcasses were S. Enteritidis, S. Agona, S. Rissen, S. Heidelberg and S. Livingstone. Results analysis showed that could be a variable number of cells contaminating refrigerated broiler carcasses, which have been selling to the consumer.

Campylobacter em humanos e sua relação com animais de produção / Campylobacter in humans and its relationship with farm animals

Bactérias do gênero Campylobacter são patógenos entérios de origem alimentar, sendo o Campylobacter jejuni freqüentemente relatado nas ocorrências de gastroenterite em seres humanos. A associação entre Campylobacter em aves e enterites no homem decorre da persistência do agente no habitat do frango de corte, que proporciona a colonização intestinal assintomática na ave, sendo esta a origem mais importante de contaminação das carcaças.O produto brasileiro é altamente competitivo no mercado mundial, razão pela qual o Campylobacter pode ser o próximo alvo para a imposição de barreiras sanitárias que, por sua vez, dificultarão as exportações do frango brasileiro para diversos mercados. Considerando a necessidade de controlar e minimizar Campylobacter em produtos de origem animal, este trabalho teve por objetivos apresentar dados sobre campilobacterioses em humanos e sua relação com animais de produção, tomando-se como premissa que, se estes tiverem menor nível de colonização por Campylobacter durante a criação, provavelmente o nível de contaminação das carcaças será diminuído, reduzindo as infecções em humanos por Campylobacter.

Antibiotic resistance in Salmonella Enteritidis isolated from broiler carcasses

Eighty Salmonella Enteritidis strains isolated from broiler carcasses between May 1995 and April 1996 in the State of Rio Grande do Sul, Brazil, were tested for antibiotic susceptibility using the disk diffusion method. Resistance to colistin, novobiocin, erythromycin and tetracycline was observed in 100 percent of the isolates. The strains showed intermediate resistance at different levels to kanamycin (1.25 percent), enrofloxacin (3.75 percent), neomycin (3.75 percent), fosfomycin (20 percent), sulphonamides (86.25 percent) and nitrofurantoin (90 percent). Resistance to ciprofloxacin, norfloxacin, gentamicin, polymyxin B, sulphametrim and sulphazotrim was not found. Since resistance to antibiotics especially those introduced in the last decades, was detected, it is recommended that their use must be based on the results of resistance tests or minimum inhibitory concentration tests.

Oitenta amostras de Salmonella Enteritidis isoladas de carcaças de frango no período entre maio de 1995 a abril de 1996 no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil foram testados para susceptibilidade antimicrobiana pelo método de antibiograma. O antibiograma das amostras apresentou 100 por cento de resistência a colistina, novobiocina, eritromicina e tetraciclina. Tiveram resistência em diferentes níveis a canamicina (1,25 por cento), enrofloxacina (3,75 por cento), neomicina (3,75 por cento), fosfomicina (20 por cento), sulfonamida (86,25 por cento) e nitrofurantoína (90 por cento) e por outro lado não apresentaram resistência a ciprofloxacina, norfloxacina, gentamicina, polimixina B, sulfametrim e sulfazotrim. A constatação de resistência a antibióticos, inclusive àqueles introduzidos na última década, enfatiza a necessidade de uso responsável de antibióticos, e com base em antibiograma ou concentração inibitória mínima.

Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of Salmonella in artificially inoculated chicken meat

The aim of this study was to develop a polymerase chain reaction (PCR) protocol for the detection of Salmonella in artificially contaminated chicken meat. Tests were performed with different dilutions of Salmonella Typhimurium or Salmonella Enteritidis cells (10-7, 10-8 or 10-9 CFU/mL) inoculated in chicken meat samples, in order to establish the limits of detection, incubation times (0, 6, 8 and 24 hours of pre-enrichment in PBW 1 percent) and three DNA extraction protocols (phenol-chloroform, thermal treatment and thermal treatment and Sephaglass). The assay was able to detect until 10-9 CFU/mL of initial dilution of Salmonella cells inoculated in chicken meat, which allows detection of Salmonella within 48 hours, including 24 hours of pre-enrichment and using the phenol-chloroform DNA extraction protocol. As the results are obtained in a shorter time period than that of microbiological culture, this procedure will be useful in the methodology for detection of Salmonella in chicken

Métodos de extraçäo de DNA para a detecçäo de Salmonella em ovos de galinhas, com e sem casca, através da reaçäo em cadeia pela polimerase / DNA extraction methods for Salmonella detection in chicken eggs, inshel and outshel, by polimerase chain reaction

O diagnóstico microbiológico de Salmonella sp em amostras de alimentos é demorado, com cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilizaçäo da técnica da Reaçäo em Cadeia pela Polimerase (PCR) pode diminuir esse período, porém sofre influência de substâncias presentes na amostra que afetam a reaçäo. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extraçäo de DNA, a extraçäo por tratamento térmico e a pelo fenol-clorofórmio, em amostras de 100 ovos de galinhas domésticas artificialmente contaminados com uma cepa de Salmonella enterica sorovar typhimurium em fase estacionária. O material obtido com as extraçöes foi submetido à PCR, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam um fragmento de 284pb do gene InvA de Salmonella sp. Comparando os métodos de extraçäo, observou-se uma diferença na capacidade de detecçäo de 12 por cento a favor do método do fenol-clorofórnio, quando a extraçäo foi realizada a partir do ovo com casca. No momento em que a mesma metodologia foi usada apenas com a parte interna dos ovos, essa diferença subiu para 26 por cento o que foi significativo (P<0,003), demonstrando que a metologia de extraçäo foi determinante para melhorar a sensibilidade da técnica. No entanto, ao comparar-se a percentagem de positivos independente da técnica de extraçäo do DNA, observou-se diferença significativa (P<0,047) a favor das amostras de ovos sem casca. Isso sugere que para a detecçäo de Salmonella por PCR deve-se utilizar apenas a parte interna dos ovos, pois a casca pode determinar interferência na técnica.

Detecçäo de Salmonella sp em ovos de galinhas através da reaçäo em cadeia pela polimerase-PCR / Detection of Salmonella in chicken eggs through the techinique of PCR

Estimativas brasileiras citam 34.000 pessoas anualmente envolvidas em surtos de toxinfecçöes alimentares causadas por Salmonella sp. Com freqüência säo indicados como fonte de infecçäo ovos ou produtos derivados como cremes, maionese e clara batida fresca. Tendo em vista dificuldades de confirmaçäo da presença destes microrganismos nestes alimentos, buscam-se alternativas de diagnóstico, entre elas a utilizaçäo da Biologia Molecular. Através da reaçäo em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se um par de oligonucleotídios que amplifica um fragmento de 284 pares de bases do gene invA (gene relacionado com a capacidade de invasäo das salmonelas), foi possível detectar a presença destas em ovos SPF contaminados experimentalmente com uma amostra de Salmonella Typhimurium que foi coletada a partir de um cultivo em meio BHI, na fase estacionária, diluída até 0,00000001 e inoculada em ovos de galinha inteiros e apenas na parte interna. Vinte e cinco gramas de ovos contaminados foram incubados a 42§C com 225 ml de água peptonada a 1 por cento. Para a extraçäo de DNA e a realizaçäo da PCR coletou-se 1ml de cada amostra, em diferentes tempos de incubaçäo em água peptonada a 1 por cento e em caldo Rappaport-Vassiliadis. As metodologias de extraçäo obedecereram protocolo do fenol-clorofórmio e pelo tratamento térmico. Obteve-se 100 por cento de recuperaçäo nas amostras com 24 horas de incubaçäo em água peptonada a 1 por cento, o mesmo acontencendo com 24 horas de caldo RV, independentemente do inóculo inicial.

Problemas locomotores em frangos de três linhagens do tipo corte: I. Aspectos clínicos, ocorrência de discondroplasia tibial e encurvamento do tibiotarso / Locomotor problems in broiler chickens of three commercial strains: I. Clinical aspects, occurrence of tibial dyschondroplasia and bowing of tibiotarsus

Estudou-se a ocorrência de problemas locomotores, discondroplasia tibial e encurvamento do tibiotarso em 18250 frangos do sexo masculino pertencentes a três linhagens do tipo corte (linhagem A: 6000 aves; linhagem B: 6250 aves e linhagem C: 6000 aves) criados nas mesmas condiçöes de manejo e alimentaçäo. Perturbaçöes locomotoras acorreram em 277 (1,5//) aves, näo se constatando diferenças significativas entre linhagens quanto ao número de indivíduos afetados: linhagem A, 90 (1,5//) casos; linhagem B, 103 (1,6//) casos e linhagem C, 84(1,4//) casos. Deformaçöes do tipo "valgus-varus" atingiram 220 (79,4//) animais após os 21 dias de idade. Artrite supurada ocorreu em 11 (4,0//) aves com problemas locomotores, isolando-se, na maioria dos casos, E. coli e Staphylococcus sp. Provas sorológicas foram negativas para Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum e reovírus (S-1133). Em 46 (16,6//) das 277 aves com problemas da locomoçäo, näo foram constatadas alteraçöes macroscópicas nos membros locomotores. Discondroplasia tibial foi diagnosticada a partir dos 28 dias de idade, em 12 (11,4//) de 105 espécimes clinicamente sadios e em 24 (30,0//) de 80 acometidos de distúrbiosda locomoçäo, näo havendo diferenças estatisticamente significativa entre linhagens quanto à suscetibilidade: linhagem A, 11 casos; linhagem B, oito casos e linhagem C, 17 casos. Encurvamento do tibiotarso afetou 29 (36,0//) de 80 aves com problemas locomotores, após a quinta semana de vida, nem sempre em associaçäo com discondroplasia tibial